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qiagen205311QuantiTect Rev. Transcription Kit

  • 更新时间:  2023-07-24
  • 产品型号:  qiagen205311
  • 简单描述
  • qiagen205311QuantiTect Rev. Transcription Kit
    QuantiTect Reverse Transcription Kit方便快速的操作过程可实现高效的逆转录,并有效去除基因组DNA。应用gDNA Wipeout Buffer可高效去除RNA样本中的基因组DNA污染。通过逆转录酶、缓冲夜和*的引物混合物可实现高效的逆转录。合成的cDNA经过优化可用于r
详细介绍

qiagen205311QuantiTect Rev. Transcription Kit 

  • cDNA合成和gDNA去除仅用20分钟完成
  • 有效去除基因组DNA,无需设计RNA特异性引物或探针
  • 高特异性,即便是低丰度的转录本也能获得高产量的cDNA
  • 转录本的5' 和3' 端区域都可以进行cDNA 合成

For 50 x 20 ul reactions: 100 ul 7x gDNA Wipeout Buffer, 50 ul Quantiscript Reverse Transcriptase, 200 ul 5x Quantiscript RT Buffer, 50 ul RT Primer Mix, 1.9 ml RNase-Free Water

逆转录试剂盒组分确保高效、高灵敏的Real-Time RT-PCR

组分优点
gDNA Wipeout Buffer仅在real-time RT-PCR 中检测RNA
Quantiscript Reverse Transcriptase

可用于广泛RNA起始量(10 pg to 1 µg RNA),高特异性

Quantiscript RT Buffer可通读困难模板
RT Primer Mix所有转录本区域合成cDNA, 甚至从5' 端区域

qiagen205311QuantiTect Rev. Transcription Kit 

原理

为获得准确的real-time RT-PCR基因表达分析结果,很重要的是仅扩增和检测cDNA。基因组DNA的干扰可通过设计横跨外显子/外显子边界的引物或探针避免。尽管如此,在某些特殊情况下(如:cDNA来自一个单外显子基因),起始RNA样品必须无基因组DNA。

使用QuantiTect Reverse Transcription Kit,基因组DNA污染物可使用*的gDNA去除缓冲液迅速有效的去除(见图:“高效去除基因组DNA,确保精确的Real-Time RT-PCR”)。因为纯化RNA样品后无需另外采用DNA酶消化,从而可节省时间和费用。并且也无需设计RNA特异性引物和探针。

低丰度转录本获得更高产量的cDNA

 CT values for IL12A
(low expression)

CT values for IL1RN
(higher expression)

Input RNA (ng)QIAGENSupplier AIIQIAGENSupplier AII
100030.932.023.124.9
10034.235.426.326.6
1037.846.829.730.3
1N.D.N.D.32.434.5

应用Real-time,两步法RT-PCR 分析IL12A 和IL1RN,起始RNA量不同 。应用QuantiTect Reverse Transcription Kit 或来自供应商Supplier AII的试剂盒逆转录总 RNA 。在 ABI PRISM 7900 上应用的QuantiTect Probe PCR Kit 、IL12A或 IL1RN的 QuantiTect Gene Expression Assays 分析合成的。 应用凯杰试剂盒CT值较低,尤其中等丰度的基因IL12A(粗体),cDNA产量更高。N.D.:未检测(Not detected)。

RT Primer Mix包含有特别优化的oligo-dT和随机引物的混合物,使cDNA合成可从RNA转录本的各个区域起始,甚至可从5'区域开始(见图:“高灵敏度检测12.5 kb 转录本5'区域的靶分子”)。相对于其他供应商提供的试剂盒来说,QuantiTect Reverse Transcription Kit为real-time PCR分析提供高产量的cDNA,无需考虑待扩增目标序列位于转录本的哪个区域。同时,QuantiTect Reverse Transcription Kit也确保了real-time RT-PCR结果更好的重复性。

 

操作流程

使用QuantiTect逆转录试剂盒可在20分钟内去除基因组DNA和合成cDNA(见流程图)。由于两个反应均在同一孵育温度并使用预混液构建反应,因此操作过程快速且方便。相反,供应商I提供的试剂盒操作需更多移液步骤且经常需要调整孵育温度,因此需要更长时间和更多手动操作。

 

应用

QuantiTect Reverse Transcription Kit可从各种类型的起始样品中合成cDNA以实现高效和高灵敏度的real-time RT-PCR,包括激光显微切割样品和活组织切片样品。与其他供应商提供的试剂相比,QuantiTect Reverse Transcription Kit在检测低丰度基因时具有更高的灵敏度(见图:“Real-Time,两步法RT-PCR精确度更高”)。

为获得高特异性和高灵敏度的real-time RT-PCR结果,又避免耗时的反应步骤优化过程,我们推荐QuantiTect Reverse Transcription Kit和其他QuantiTect产品联合使用。包括经优化的PCR反应预混液和即用型引物,使用SYBR Green染料法或序列特异性探针法进行 real-time RT-PCR。

Images

高效去除基因组DNA,确保精确的Real-Time RT-PCR — A 高灵敏度检测12.5 kb转录本5'区域的靶分子 快速方便的cDNA合成 高灵敏度的Real-Time,两步法RT-PCR

 

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