PIERCE超敏型发光液用于检测直接或间接标记辣根过氧化物酶(HRP)的抗体及其关联的抗原。其原理是，蛋白质或核酸在电泳后转移到印迹膜上，以一抗及HRP标记的二抗结合膜上的目的蛋白，或以HRP标记的探针直接或间接结合膜上的核酸。洗膜后用本产品配制的ECL工作液，室温孵育膜数分钟，将印迹膜用保鲜膜包被粘贴固定于X光片曝光暗盒。然后转入暗室将X光胶片压在膜上曝光数秒到数小时，显影定影后蛋白质或核酸条带可清晰显示在X光胶片上。
 

　　采用*的发光底物系统，降低曝光背景的同时引入新型的氧化剂，大大提高试剂盒的稳定性，使其在室温能稳定放置一年。除用于X光片，还可直接使用荧光CCD扫描，主要用于WB检测以及化学发光免疫检测系统。
 

　　PIERCE超敏型发光液使用方法:
 

　　1.常规电泳、转膜、HRP标记抗体或核酸探针孵育、洗膜。注意用HRP标记lgG或用一抗-链亲和素-HRP夹法。核酸杂交膜用HRP标记探针杂交，洗膜。
 

　　2.洗涤膜上的HRP标记二抗时，配制新鲜发光工作液：分别取等体积的溶液A和B混合，放置使之升到室温否则会减弱荧光强度。建议立即使用工作液，室温放置数小时后仍可使用但灵敏度略有降低。
 

　　3.用镊子取出膜，搭在滤纸上沥干洗液但勿使膜*干燥。将膜*浸入并与发光工作液(0.125ml发光工作液/cm2膜)充分接触。室温孵育1分钟，准备立即压片曝光。孵育时间过长不会增加灵敏度，有时还会导致曝光条带异常。发光过程的本质是酶促反应，使用过少的发光工作液不利于反应进行，也会导致膜上条带曝光不均，明显降低灵敏度。为达节约目的可将膜剪小但勿降低发光液用量。
 

　　4.用镊子夹起膜，搭在滤纸上沥干发光工作液。但勿洗去发光液。
 

　　5.在X光胶片暗盒内面铺一张面积大于膜的保鲜膜。将杂交膜贴在保鲜膜上，将保鲜膜折起来*包裹杂交膜，去除气泡和皱褶，可剪去边缘部多余的保鲜膜。用滤纸吸去多余的发光工作液。用胶带将覆盖杂交膜的保鲜膜固定在暗盒内，蛋白带面向上。
 

　　6.在黑暗中放入X光胶片，分别曝光不同的时间如数秒到数分钟。显影冲洗。
 

　　PIERCE超敏型发光液注意事项：
 

　　1.步骤1-5可在日光灯下操作；但发光液曝露于强光下时间过久灵敏度可能略有降低，移到暗房操作可避免之。戴手套可以避免在膜上留下手印。
 

　　2.长时间曝光或蛋白过量，将加深背景并使条带强弱变化失去线性关系。曝光不足则条带模糊。
 

　　3.发光工作液孵育约1分钟后膜上的条带发光。强条带发光在暗房中肉眼可见，低丰度蛋白条带发光较弱甚至肉眼不可见但可使X光胶片曝光。不能简单以肉眼观察判断条带发光时间。肉眼不可见的荧光实际上可持续数小时并使X光胶片感光，因而弱带可曝光1-10小时。如果曝光后条带不佳，可用洗膜缓冲液洗膜，重新孵育二抗，然后重新用ECL发光和曝光。
 

　　4.由于PIERCE超敏型发光液极其灵敏，强烈推荐大多数进口抗体起始浓度为一抗1:1000-1:4000，二抗1:2000-1:5000。抗体浓度过高将造成高背景或没有条带，导致失败!